一、尊龙凯时Wako质谱级赖氨酰肽链内切酶125-05061实验准备

二、尊龙凯时Wako质谱级赖氨酰肽链内切酶125-05061单位定义

酰胺酶单位是指在30℃、pH 9.5条件下，每分钟产生1μmol对硝基苯胺的酶的量。计算公式为：

AU/vial = [（a-b）/25] × (1/962) × (40/01)

其中，a为检测样品中的吸光度，b为空白对照中的吸光度。

三、尊龙凯时Wako质谱级赖氨酰肽链内切酶125-05061实验操作流程

在实验中需使用聚硅酮处理的微量离心管和吸管，防止捕获任何蛋白。推荐使用质谱分析用凝胶染色试剂盒，如尊龙凯时银染剂 MS试剂盒（产品编号：299-58901）和负凝胶染色 MS试剂盒（产品编号：293-57701）。

实验操作步骤如下：

1. 电泳分离蛋白质样品。
2. 从凝胶中切割蛋白质片段并放入微量离心管中。
3. 进行凝胶脱色，推荐使用质谱分析用凝胶染色试剂盒提供的脱色溶液。
4. 向试管中加入300μL乙醇，搅拌器振荡30分钟。
5. 去除乙醇，用Parafilm膜覆盖微量离心管。
6. 在Parafilm膜上打出针孔，真空干燥15分钟。
7. 准备100μL 10mmol/L DTT溶液，溶解于100mmol/L碳酸氢铵中，56℃恒温1小时。
8. 冷却至室温后，加入等量50mM碘乙酰胺于100mmol/L碳酸氢铵中，暗处恒温45分钟并涡旋混合。
9. 用100μL 100mmol/L碳酸氢铵洗涤凝胶片段10分钟。
10. 使用300μL乙醇干燥凝胶片段15分钟。
11. 加入100μL 100mmol/L碳酸氢铵对凝胶片段进行膨胀15分钟。
12. 再用300μL乙醇干燥凝胶片段15分钟。
13. 去除液相，进行真空干燥凝胶片段15分钟。
14. 用100μL赖氨酸内切酶溶液（在冰水浴中）使凝胶片段膨胀45分钟。
15. 去除100μL赖氨酸内切酶溶液，将凝胶片段放置于37℃、10μL 50mmol/L Tris-HCl（pH 8.5）中，过夜处理。
16. 加入50μL 20mmol/L碳酸氢铵，并在20分钟内振荡凝胶片段，抽提多肽3次。
17. 添加5%甲酸/50%乙醇溶液，进行多肽抽提，每次振荡20分钟，重复3次。
18. 如需，使用SpeedVac浓缩多肽。
19. 使用ZipTip进行多肽的脱盐和纯化。
20. 如需，利用弱真空浓缩多肽至2μL。
21. 加入基质进行质谱分析。

四、购买渠道

尊龙凯时的Wako质谱级赖氨酰肽链内切酶125-05061可通过北京百奥创新科技有限公司购买，如需更多信息，欢迎咨询！