一、尊龙凯时质谱级赖氨酰肽链内切酶125-05061实验准备

二、尊龙凯时质谱级赖氨酰肽链内切酶125-05061单位的定义

酰胺酶单位是指在30℃、pH 9.5条件下，每分钟产生1μmol对硝基苯胺所需的酶量。单位计算公式为：
AU/vial = [(a - b) / 25] × (1 / 962) × (40 / 1)
其中，a为检测样品中的吸光度，b为空白对照中的吸光度。

三、尊龙凯时质谱级赖氨酰肽链内切酶125-05061实验操作流程

为防止蛋白质的捕获，请使用聚硅酮处理的微量离心管和吸管端。利用质谱分析用的凝胶染色试剂盒（如银染剂MS试剂盒及负凝胶染色MS试剂盒）进行以下操作：
1. 电泳分离蛋白质样品；
2. 从凝胶中切割出蛋白质片段，并放入微量离心管；
3. 使用质谱分析用凝胶染色试剂盒中的脱色溶液使凝胶脱色；
4. 向试管中加入300μL乙腈，搅拌振荡30分钟；
5. 去除乙腈，并用Parafilm膜覆盖微量离心管；
6. 在Parafilm膜上打孔，进行真空干燥15分钟；
7. 将100μL 10mmol/L DTT溶解于100mmol/L碳酸氢铵中，56℃恒温1小时；
8. 室温冷却后，用等量的50mM碘乙酰胺（IAM）溶解于100mmol/L碳酸氢铵中，暗处恒温45分钟并涡旋；
9. 用100μL 100mmol/L碳酸氢铵洗涤凝胶片段10分钟；
10. 用300μL乙腈干燥凝胶片段15分钟；
11. 用100μL 100mmol/L碳酸氢铵对凝胶片段进行膨胀15分钟；
12. 用300μL乙腈再次干燥凝胶片段15分钟；
13. 去除液相，再进行15分钟的真空干燥；
14. 用100μL赖氨酸内切酶溶液在冰水浴中溶胀凝胶片段45分钟；其中赖氨酸内切酶需稀释于50mmol/L Tris-HCl, pH 8.5；
15. 去除100μL赖氨酸内切酶溶液，将凝胶片段放入37℃、10μL 50mmol/L Tris-HCl, pH 8.5中，进行过夜孵育；
16. 加入50μL 20mmol/L碳酸氢铵，在20分钟内对凝胶片段进行三次抽提多肽；
17. 加入5%甲酸/50%乙腈，在20分钟内进行三次抽提多肽；
18. 如有需要，可使用SpeedVac浓缩多肽；
19. 采用ZipTip进行多肽的脱盐与纯化；
20. 如有需要，可使用弱真空浓缩多肽至2μL；
21. 添加基质进行质谱分析。

四、购买渠道

尊龙凯时的代理商——北京百奥创新科技有限公司，提供尊龙凯时质谱级赖氨酰肽链内切酶125-05061等产品，欢迎前来咨询！