尊龙凯时的感染预实验采用24孔培养板，针对目标细胞和工具细胞的感染情况进行初步评估。可选择的工具细胞包括293T（人胚肾上皮细胞）、H1299（人肺癌细胞）等。实验所需材料包括培养基、24孔培养板、移液枪、枪头、EP管、细胞计数板、冰盒及废液收集容器等。（根据目标细胞的特性，可以适量使用Polybrene。）

实验步骤

第一天：细胞准备

培养细胞至对数生长期后，使用胰酶消化并计数。用细胞计数板测定细胞密度，每孔接种5×10⁴个细胞，并添加500μL细胞培养液。一般情况下，H1299或293T细胞在感染后第三天可达到80%-90%的融合度。（请根据目标细胞的生长速度合理调整接种量，以确保在感染后第三天达到80%-90%的融合度。）

第二天：感染步骤

(1) 准备慢病毒颗粒：根据需求计算所需的慢病毒颗粒量，将冻存在-80℃的慢病毒颗粒取出，置于冰浴中融化。

(2) 感染目标细胞：从培养箱中取出细胞，使用显微镜观察细胞的生长状态及融合度。如果细胞状态良好，则开始实验：

• A. 小心吸去24孔板中的旧培养液，加入新鲜的完全培养液。
• B. 向细胞中加入事先计算好的慢病毒颗粒液，并将培养板平放在工作台上，以“8”字形轻轻混匀。
• C. 混匀后，将培养板放入37℃、5% CO₂的培养箱中过夜培养。

第三天：更换培养液

细胞感染12-16小时后，吸去含慢病毒颗粒的培养液，重新添加含5%灭活FBS（胎牛血清）的新培养液，继续培养。（目标细胞的感染时间需根据细胞类型调整，部分细胞不宜感染超过12小时。）

第四天：观察细胞状态

继续培养细胞，观察细胞状态是否正常，及时记录任何异常现象。

第五天：评估感染效率

使用70%乙醇清洁24孔培养板外表，随后在倒置荧光显微镜下观察荧光情况，拍照并评估慢病毒颗粒对细胞的感染效率。（如果慢病毒携带的基因表达时间较长，建议在感染72或96小时后再观察荧光表达情况。）

根据观察到的荧光情况，可以在初步实验中初步确定目标细胞的MOI值，为后续的实验奠定基础，助力更多研究成果的实现。尊龙凯时致力于推动生物医疗领域的发展，助您在科研路上不断进步。